細胞周期分析是分子生物學常用的實驗方法，尤其在抗腫瘤藥物研究上使用普遍。但細節處理不好，做得再多也做不出正確的、好看的分布圖。

今天來策下如何準確制備細胞周期測試的樣品，真的是百試百靈哦！

簡單介紹下實驗原理

碘化丙啶（PI）是一種核酸染料，可以與 DNA 和 RNA 結合，但其不能透過正常的細胞膜，所以對活細胞無染色作用。可通過冷乙醇或其他破膜劑的作用，使細胞膜通透性增加。

PI 進入細胞內后，選擇性地與核酸結合，RNase 裂解 RNA 后，細胞內染料的熒光量與細胞核內的 DNA 含量成正比。

通過流式細胞儀檢測單個細胞熒光強度得到相對 DNA 含量，根據各個時相 DNA 含量不同，將細胞分為不同的周期。

具體操作流程及注意事項

將對數期的細胞接種于 6 孔板中（2×105 個 / 孔，根據細胞大小、增值速度適當調整），每孔加 2 ml 培養基培養。

細胞貼壁后（根據細胞具體情況），去除培養基，分別加入培養基配置的不同濃度藥物 1 ml 孵育（不使用造成細胞大量死亡的藥物濃度和孵育時間）。

藥物作用結束后，收集培養液，1500 rpm，離心 4 min。一定要一并收集漂浮的死細胞，不然會嚴重影響結果。

消化收取貼壁細胞，吹打過程一應要輕柔充分，避免細胞受損、細胞黏連；離心轉速為 2000 rpm，離心 4 min（離心轉速不要超過 2000 rpm，也可以采用 1000 rpm，離心 5 min），PBS 洗 3 遍，以去除培養基、藥物殘留及細胞碎片。合并培養液和貼壁細胞。

注意！注意！！注意！！！

整個過程一定要盡量降低操作對細胞的損傷，要吹打輕柔，減少離心次數，轉速不要超過 2000 rpm。

消化細胞時要保證細胞吹散，不要有細胞黏連，一旦這一步驟沒有消化充分，后面很難再將細胞吹散，后果嚴重。

測試時細胞濃度一定要根據流式細胞儀的檢測范圍，不然可能會影響準確度。

今天就策到這里，下次告訴大家 FlowJo 軟件分析細胞周期相分布時的注意事項，因為作者發現有 SCI 文章的流式周期分布圖，明顯是造假出來的，哈哈哈哈……